簡述純化柱的規范使用方法
點擊次數：134 更新時間：2026-01-21
純化柱是色譜分析、樣品前處理及生物制藥中實現目標物分離、富集與凈化的核心耗材，廣泛應用于HPLC、SPE（固相萃取）、蛋白純化及水處理等領域。其性能直接決定回收率、純度與實驗重復性。若操作不當，易因裝填不均、流速失控、溶劑不兼容或再生失效，導致柱效下降、背壓升高甚至柱床干裂。掌握純化柱的規范使用方法，是實現分得清、收得高、用得久的關鍵保障。
一、使用前準備
充分活化：
反相柱（如C18）先用甲醇或乙腈沖洗5–10柱體積，再轉至水相；
離子交換柱用高鹽緩沖液平衡；
避免干柱上樣，防止氣泡滯留破壞流路均勻性；
溶劑互溶過渡：樣品溶劑與初始流動相需互溶，否則易析出沉淀堵塞柱頭。
二、上樣與洗脫
上樣量適中：不超過柱載量（通常≤5%柱體積），過載會導致峰拖尾或穿透；
流速合理匹配：
分析柱：0.5–2mL/min；
制備柱：按線速度（cm/h）計算，避免過高流速降低分離效率；
梯度洗脫優化：緩慢改變洗脫強度，提升分辨率，尤其對復雜混合物。
三、柱后處理
清洗：
反相柱：先用水/有機相（如95:5）沖洗鹽分，再用高比例有機相（如90%甲醇）保存；
蛋白純化柱：用0.5MNaOH或20%乙醇消毒，去除內毒素與微生物；
正確保存：
反相柱存于甲醇/乙腈中；
親水柱（如HILIC）可存于乙腈/水（90:10）；
禁止將含緩沖鹽的柱子直接放入純有機相，防止鹽析結晶堵塞。
四、壓力與溫度監控
背壓異常預警：壓力突升可能因篩板堵塞，需反沖或更換入口濾片；
控溫使用：高溫可提升傳質效率，但超過柱溫限（通常60℃）會加速鍵合相水解。
五、再生與壽命管理
定期再生：
C18柱可用強溶劑（如異丙醇）沖洗強保留雜質；
離子交換柱用NaCl梯度洗脫殘留蛋白；
記錄使用次數：建立《純化柱日志》，標注樣品類型、壓力變化、理論塔板數，預判更換周期。
六、安全與禁忌提醒
在線客服